Determination of Cocaine and Benzoylecgonine in Human Plasma by Lc-ms/ms

A high-throughput Liquid chromatography/ Mass spectrometry/ Mass spectrometry (LC/MS/MS) method for simultaneous quantification of cocaine (COC) and benzoylecgonine (BZE) in human plasma was elaborated. After the protein precipitation with methanol in the plasma samples, the analytes were separated on a Zorbax SB-C18 column under isocratic conditions using a 32:68 (v/v) mixture of methanol and 0.1% formic acid in water at 45oC, with a flow rate of 1 mL/min. The detection was in multiple reaction monitoring (MRM) mode (m/z 290 → m/z 168 for BZE and m/z 304 → m/z 182 for COC, respectively). Calibration curves were generated over the range of 20-2000 ng/mL for both BZE and COC (r > 0.992). In the laboratories that are not equipped with a LC/MS/MS system, the LC analysis of COC and BZE requires a previous isolation step. Therefore, the elaborated LC/MS/MS method was applied for the study of optimum experimental conditions for the isolation of COC and BZE from human plasma. Several solvent mixtures and solid-phase extraction (SPE) cartridges were tested at different pH values. The best results for both analytes were obtained by SPE on Oasis HLB cartridges (mean recovery of 71 % for COC and 92.4 % for BZE, n = 3). Both the elaborated LC/MS/MS method and the best extraction conditions can successfully be applied in clinical and forensic toxicology for the rapid quantification of COC and BZE in human plasma. Rezumat S-a elaborat o metodă rapidă LC/MS/MS pentru cuantificarea simultană a cocainei (COC) şi benzoilecgoninei (BZE) din plasma umană. După precipitarea proteinelor cu metanol în probele de plasmă, analiţii s-au separat pe o coloană Zorbax SBC18 în condiţii izocratice folosind un amestec 32:68 (v/v) de metanol şi soluţie apoasă de acid formic 0,1%, la 45oC cu un debit de 1 mL/min. Detecţia s-a realizat în modul MRM (monitorizarea reacţiilor multiple) (m/z 290 → m/z 168 pentru BZE, respectiv m/z 304 → m/z 182 pentru COC). Curbele de calibrare s-au realizat pe domeniul de concentraţii 202000 ng/mL atât pentru BZE cât şi pentru COC (r > 0.992). În laboratoarele care nu sunt echipate cu un sistem LC/MS/MS, analiza LC a COC şi BZE necesită anterior o etapă de izolare. Astfel, metoda LC/MS/MS elaborată s-a aplicat în studiul condiţiilor experimentale optime necesare izolării COC şi BZE din plasma umană. S-au testat mai multe amestecuri de solvenţi şi cartuşe de extracţie pe fază solidă (EFS) la diferite valori de pH. Cele mai bune rezultate s-au obţinut prin EFS cu cartuşe Oasis HLB (regăsiri medii de 71 % pentru COC şi 92.4 % pentru BZE). Atât metoda LC/MS/MS elaborată cât şi cele mai bune metode de extracţie evidenţiate se pot aplica cu succes în toxicología clinică şi medicolegală în vederea dozării rapide a COC şi BZE din plasma umană. FARMACIA, 2009, Vol. 57, 3 302